Fluoresceína isotiocianato Cas 27072-45-3

Isotiocianato de fluoresceínaorange red, isothiocyanate fluorescent yellow, isothiocyanate fluorescent red, isothiocyanate fluorescein isomer I, 5-isothiocyanate fluorescein. Yellow powder. It is hygroscopic. It can bind with various antibody proteins, and the antibody after binding does not lose the specificity of binding with certain antigen. It still has strong green fluorescence in alkaline solution. After adding acid, it precipitates, and the fluorescence disappears. It is slightly soluble in acetone, ether and petroleum ether. It is a biochemical reagent as well as a medical diagnostic drug, which can quickly diagnose diseases caused by bacteria, viruses, parasites, etc. In addition, it can bind with various antibody proteins, and the antibody after binding does not lose the specificity of binding with certain antigen, and there is still strong green fluorescence in alkaline solution. After adding acid, it precipitates, and the fluorescence desaparece e é ligeiramente solúvel em acetona, éter e éter petrolífero .

Estudo sobre as propriedades deisotiocianato de fluoresceínaInsulina marcada para gelatina aminada e sua aplicação na administração nasal da mucosa:

Sob a condição de nenhum emulsificante externo, a solução aquosa de gelatina aminada foi dispersa em azeite e um novo tipo de microesferas de gel carregadas positivamente, microesferas de gelatina aminadas, foram preparadas através dos processos de emulsificação, a paredidatação de {1.}} o tamanho médio da {1.}.. o tamanho médio da....}.}.}}}.}}}}} m. The size is evenly distributed. The dried microspheres can absorb about 20 times of their own weight of water to form hydrogels. Aminoated gelatin microspheres have higher amino content than gelatin microspheres. They are positively charged in distilled water and phosphate buffer solution, and the Zata O potencial em água destilada é 41 . 5 mV.

With the increase of glutaraldehyde concentration or the extension of crosslinking reaction time, the amino content of microspheres decreased. However, regardless of the crosslinking reaction conditions, the aminated gelatin microspheres prepared by this method have higher primary amino content than the gelatin microspheres. Aminoated gelatin microspheres can be degraded rapidamente (<1h) in the presence of trypsin, but slowly (>20h) em pepsina e meio-base ácido . A interação entre microesferas de gelatina aminada e mucina é mais forte que a entre as microesferas de gelatina . a alta densidade de carga positiva de gelatina aminada {{3. a interação com a MUCN {{{{{{{{{{gelatina é, é a, é a é, é foi é é sido é é sido é fita) é é ou deve Fe.) f. As microesferas foram estudadas pelo método de marcação de fluorescência e tecnologia de degradação enzimática in vitro, usando o modelo isolado de lavagem de perfusão gástrica de rato e experimento in vivo em ratos .

The results showed that under the same experimental conditions, the number of aminated gelatin microspheres retained in the isolated rat stomach was more than that of gelatin microspheres, and the type of irrigation solution (artificial gastric juice or PH7 human phosphate buffer) had no significant effect on the gastric retention of microspheres, which indicated that the electrostatic interaction between the microspheres and gastric mucus was not the decisive factor for the gastric retention of microspheres in this model. However, in the experiment, it was found that the amount of aminated gelatin microspheres retained in the isolated rat stomach decreased with the increase of the concentration of the crosslinking agent glutaraldehyde when preparing the microspheres, which indicated that the gastric mucosal adhesion of the aminated gelatin microspheres might be afetado pelo conteúdo amino na superfície das microesferas ou pelo grau de reticulação .

Os resultados experimentais in vivo em ratos mostraram que as microesferas de gelatina tinham uma melhor adesão da mucosa do que as microesferas de gelatina . Os efeitos da gelatina aminada na absorção nasal de glucano e insulina foram investigados em ratos saudáveis {{}}}}} os resultados de 0 {… {}}}}}}, os resultados de 0 {} {}}}}}} {} {}}}. Promova significativamente a absorção da fluoresceína isotiocianat glucano da mucosa nasal de rato com uma biodisponibilidade de 23 . 8%. Após a administração intranasal de 10 IU insulina fosfato contendo 0 2% (p/v) amino gelatina, o nível de glicose no sangue foi significativamente menor que o tampão de fosfato de insulina.

Isotiocianato de fluoresceína(FITC), como um reagente clássico de rotulagem fluorescente, tornou -se uma ferramenta indispensável nos campos da ciência da biologia, medicina e materiais devido ao seu alto rendimento quântico, excelente fotoestabilidade e boa biocompatibilidade .

Marcadores biomoleculares: rastreamento preciso de proteínas a ácidos nucleicos

 

O grupo isotiocianato (- n =} c=s) do FITC pode sofrer reações covalentes com grupos ativos como grupos amino e tiol em biomoléculas, formando o rótulo .} esse característico faz com que o relevante preferido para o reagente preferido para o.}, o relevante preferido para o.}}
Rotulagem de proteínas e pesquisa funcional
FITC alcança marcação específica através da ligadura a resíduos de lisina de proteínas como anticorpos e lectinas. Por exemplo, em experimentos de imunofluorescência, anticorpos marcados com FITC podem se ligar a antígenos de superfície celular e analisar quantitativamente os níveis de expressão de antígenos por meio de microscopia de fluorescência ou cito fluorometria. Os dados experimentais mostram que a intensidade de fluorescência do conjugado FITC IgG está relacionada linearmente a concentração do antígeno, e a sensibilidade de detecção pode alcançar o nível Danak. Além disso, proteínas marcadas com FITC também podem ser usadas para estudos de interação de proteínas, como analisar mudanças conformacionais de proteínas através da transferência de energia de ressonâncio de fluorescência (FRET).

 

Marcação de ácido nucleico e hibridação molecular
FITC can be chemically modified to label the 5 'or 3' end of nucleic acids for fluorescence in situ hybridization (FISH) technology. In cancer research, FITC labeled probes can specifically bind to chromosomal abnormal regions to assist in the diagnosis of hematological diseases such as leukemia and lymphoma. For example, FITC probes targeting Os genes de fusão BCR-ABL podem exibir sinais fluorescentes amarelos em núcleos de células interfase com uma taxa de precisão superior a 95%.
Marcação de peptídeos e administração de medicamentos
Os peptídeos marcados com FITC desempenham um papel importante nos sistemas de entrega de medicamentos . tomando M2PEP-FITC como exemplo, essa molécula é composta por um peptídeo m2PEP de segmentação e um grupo de fitc de fitc de fitc, que pode reconhecer especificamente os receptores de células tumorais e atingem a entrega de drogas alvo.}}}}}}}}}} Os tecidos tumorais são 3 . 2 vezes o dos medicamentos livres, melhorando significativamente a eficácia terapêutica e reduzindo os efeitos colaterais.

Diagnóstico médico: desde a detecção de patógenos até a triagem precoce de tumores

 

As propriedades de fluorescência do FITC o tornam o "padrão -ouro" no campo de diagnóstico in vitro, amplamente utilizado em técnicas como imunocromatografia, citometria de fluxo e elisa .
Detecção rápida de patógenos
FITC labeled antibodies can be used for rapid diagnosis of bacterial, viral, and parasitic infections. For example, in malaria diagnosis, FITC labeled anti malaria antibodies bind to the patient's blood smear, and the green fluorescence signal of the parasite is observed through fluorescence microscopy. The detection time is shortened from 2 hours in traditional methods A 15 minutos, e a sensibilidade atinge 98%. Além disso, as sondas de ácido nucleico marcadas com FITC também podem ser usadas para detectar ácidos nucleicos do vírus respiratório, como o gene orf1ab de Sars-Cov -2, com uma especificidade de 99. 2%.

 

Marcadores tumorais
Em citometria de fluxo,Isotiocianato de FuoresceínaOs anticorpos anti-CD45 marcados podem distinguir células de leucemia das células sanguíneas normais . Os dados mostram que a taxa positiva de anticorpo CD34 marcado com FITC no diagnóstico de fita de leucemia mielóide aguda (AML) é de 85%, que é 20% superior a um exame morfológico tradicional de tuminação tumida.} (CTC) A tecnologia de detecção pode capturar células tumorais em concentrações extremamente baixas no sangue periférico, fornecendo um novo método para o diagnóstico precoce de tumores sólidos, como câncer de mama e câncer de pulmão .
Diagnóstico de doenças autoimunes
In ELISA technology, FITC labeled autoantibodies (such as anti nuclear antibodies and anti double stranded DNA antibodies) can be used for the diagnosis of diseases such as systemic lupus erythematosus (SLE). Experiments have shown that FITC-ELISA has a sensitivity of 92% and a specificity of 95% for detecting anti Sm antibodies, which is significantly Melhor que os métodos tradicionais de imunofluorescência .

Pesquisa de biologia celular: da estrutura subcelular ao rastreamento dinâmico

 

A permeabilidade celular e a baixa toxicidade do FITC o tornam uma ferramenta ideal para imagem celular, amplamente usada na localização de organelas, observação da divisão celular e pesquisa de apoptose .
Rotulagem de organelas celulares e observação dinâmica
FITC labeled mitochondrial probes (such as MitoTracker Green) can specifically bind to mitochondrial membrane potential and monitor mitochondrial morphological changes in real-time. In neuronal research, FITC labeled microtubule protein antibodies can display the dynamic extension of axon growth cones, revealing the mechanism of neural development. In addition, As sondas de lisossomo marcadas com FITC (Lysotracker Green) também podem ser usadas para estudar processos de autofagia, quantificando o número de autofagossomos através de mudanças na intensidade da fluorescência .

 

Ciclo celular e análise de apoptose
In flow cytometry, FITC labeled propidium iodide (PI) can bind to DNA and distinguish different stages of the cell cycle (G0/G1, S, G2/M) by fluorescence intensity. Experimental data shows that the sensitivity of FITC-PI double staining method for detecting cell apoptosis is 98%, which is 30% higher than the traditional Método de coloração com azul de tripano . Além disso, as sondas de anexina V marcadas com FITC podem se ligar especificamente à fosfatidilserina exposta na superfície das células apoptóticas, alcançando a identificação precisa das células apoptóticas precoces .}
Pesquisa sobre migração celular e invasão
Em experimentos transwell, as células marcadas com FITC podem monitorar o processo de migração em tempo real ., por exemplo, no estudo das metástases tumorais, a taxa de migração de células de câncer de mama marcada com FITC (MCF {}}}) através da cola de matriz é positivamente correlacionada com a capacidade de invasão, o fornecimento de Quantit, indicações, que não se correlaciona positivamente, com a capacidade de invasão, a capacidade de invasão, a capacidade de invasão, a capacidade de invasão-7}), para que a cola da matriz seja positivamente correlacionada com a capacidade de invasão, a capacidade de invasão, forneça a capacidade de invasão, forneça a capacidade de invasão.

Desenvolvimento de medicamentos: da validação do alvo à avaliação de eficácia

 

O FITC desempenha várias funções no desenvolvimento de medicamentos, incluindo validação de destino, avaliação do sistema de administração de medicamentos e estudos farmacocinéticos .
Validação -alvo e pesquisa de mecanismo de ação
FITC labeled small molecule inhibitors can be used to validate drug targets. For example, FITC labeled EGFR inhibitors (such as gefitinib) can demonstrate the binding of drugs to EGFR receptors on the surface of tumor cells, quantifying the binding affinity (Kd value) through fluorescence intensity. In addition, FITC labeled siRNA can also be used Para estudar a eficiência do silenciamento de genes, fornecendo uma base para a terapia de interferência de RNA .

Avaliação do sistema de entrega de medicamentos
Nanopartículas marcadas com FITC (como lipossomas e microesferas de polímero) podem monitorar o comportamento de distribuição e liberação de medicamentos in vivo em tempo real .

 

Experimentos mostraram que o acúmulo de lipossomas peguilados marcados com FITC nos tecidos tumorais é 2 . 8 vezes o dos medicamentos livres, e o sinal de fluorescência pode durar 24 horas, fornecendo dados visuais para otimizar sistemas de administração de medicamentos.

Estudos farmacocinéticos e toxicológicos
FITC labeled drug molecules can be quantitatively analyzed for their absorption, distribution, metabolism, and excretion (ADME) processes in vivo through fluorescence imaging technology. For example, the fluorescence intensity of FITC labeled antibiotics (such as vancomycin) in the kidneys is linearly related to drug concentration, providing a basis for optimizing drug DOSAGE . Além disso, os ensaios de citotoxicidade marcados com FITC também podem avaliar os danos dos medicamentos às células normais e orientar as avaliações de segurança .

Ciência dos Materiais: De sensores a sondas fluorescentes

 

As características de resposta da fluorescência do FITC o tornam exclusivamente aplicável no campo da ciência dos materiais, incluindo o desenvolvimento de sensores de pH, sensores de temperatura e sondas de íons metálicos .
Sensor de fluorescência responsiva ao pH
A intensidade de fluorescência deisotiocianato de fluoresceína is significantly affected by the pH value of the solution. In weakly acidic environments (pH 5.0-6.5), protonation of FITC groups leads to increased fluorescence intensity; Under alkaline conditions (pH>8 . 0), a fluorescência é extinta ., com base nessa característica, as nanopartículas modificadas do FITC podem ser usadas para monitorar as flutuações intracelulares da base do ácido., por exemplo, a intensidade da fluorescência da biliribina do tumorn., por exemplo, a fluorescência da biliribina do tumor. diagnóstico.

 

Sonda fluorescente responsiva à temperatura
A vida útil da fluorescência do FITC muda com a temperatura . em condições de baixa temperatura (4 graus), a vida útil da fluorescência das microesferas de polímero marcada com FITC é estendida a 5 . 2 nanossegundos, que é 1 . 8 vezes maior que a temperatura de sol (25 graus). Essa característica o torna uma ferramenta ideal para estudar processos de transição de fase e criopreservação celular.
Sonda de detecção de íons de metal
O FITC reduz significativamente a intensidade da fluorescência quando combinada com íons metálicos como Cu ² ⁺ e Hg ² ⁺, tornando -o adequado para monitoramento ambiental ., por exemplo, fitc modificado em sílica gel em que as nanopartículas de detecção têm um limite de detecção, que.} 1 nm para Hg ⁺ ⁺ ⁺ ⁺ ⁺.} 1 nm para Hg ⁺ ⁺ ⁺ ⁺ ⁺.} 1 nm para Hg ⁺ ⁺ ⁺ ⁺ ⁺)

Agricultura e gado: da detecção de patógenos à melhoria da variedade

 

A aplicação do FITC no campo agrícola está se expandindo gradualmente, incluindo detecção de vírus da planta, diagnóstico de doenças animais e identificação de pureza de variedade .
Detecção rápida de vírus vegetais
Os anticorpos de vírus marcados com FITC podem ser usados para detectar o vírus do mosaico do tabaco (TMV), o vírus do mosaico de pepino (CMV) e outros vírus . experimentos mostram que a sensibilidade do FITC-ELISA para a detecção de TM, que é 0.} Métodos . Além disso, as sondas de ácido nucleico marcadas com FITC também podem ser usadas para detectar genes exógenos em culturas geneticamente modificadas, como genes BT resistentes a insetos.

Diagnóstico de doenças animais
Os anticorpos marcados com FITC podem ser usados para detectar o vírus da febre suína (CSFV), o vírus da influenza aviária (AIV) e outros vírus .

 

No diagnóstico da febre suína, anticorpos anti-CSFV marcados com FITC se ligam a seções de tecido e observam a distribuição do vírus através da microscopia de fluorescência, reduzindo o tempo de detecção de métodos tradicionais de 3 dias para 6 horas. Além disso, a citometria de fluxo marcada com FITC também pode ser utilizada para detectar células T específicas de patógenos no sangue animal e avaliar a intensidade da resposta imune.
Identificação de pureza da variedade
FITC labeled DNA probes can be used to identify the purity of crop varieties. For example, the FITC probe targeting the rice blast disease resistance gene Pi ta can accurately distinguish between homozygotes and heterozygotes in hybrid rice seeds, with a purity identification accuracy of 99.5%. In Além disso, os marcadores moleculares de SSR marcados com FITC também podem ser usados para análise de diversidade genética de raças de gado e aves, fornecendo base científica para a criação.

Synthesis of FITC: 4-nitrophthalic anhydride (see C8H3NO5, [5466-84-2]) reacts with resorcinol at 195-200℃C for 10h, cyclizes into a mixture of 3 'nitrofluorescein and 4' - nitrofluorescein, acetylates with acetic anhydride, Os hidrolisos com solução de etanol de hidróxido de sódio saturada, a nitrofluoresceína de 4 "é obtida .} Então 4 ' - nitrofluoresceína é dissolvida em água de amônia, reagida com o raciamento de níquel e hidrato de hidrazina à temperatura do ambiente» »» »» »» »» – amino -fluorese e hidrato de hidrazina (»» »» »' – amino -aminonte e hidrato de hidrazina» »» »» »– aminofleto e hidrato de hidrazina» »» »» '' – aminolel. eliminado para obterisotiocianato de fluoresceína.

FITC pure product is yellow or orange crystalline powder, which is easily soluble in water and alcohol solvent. There are two isomers, among which isomer type I is better in efficiency, stability and protein binding. The molecular weight of FITC is 389.4, the maximum absorption wavelength is 490~495 nm, and the maximum O comprimento de onda de emissão é de 520 ~ 530 nm, mostrando a fluorescência verde amarela brilhante . FITC pode ser armazenada por muitos anos em lugares frios, escuros e secos, e é o mais amplamente utilizado fluoresceína . sua principal vantagem é que o olho humano é mais sensível para o verde amarelo e a fluoresnce verde.

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