Retatrutida(link:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptídeo/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) é um agonista polipeptídico GLP-1R/GIPR/GCGR de ação prolongada, sintetizado quimicamente, destinado ao tratamento de diabetes tipo 2 em adultos, controle de peso e fígado gorduroso não alcoólico/esteatohepatite não alcoólica. A indicação deste produto para diabetes tipo 2 em adultos foi aprovada para uso clínico em 29 de agosto de 2023. Além disso, o pedido de registro clínico de indicações para fígado gorduroso não alcoólico/esteatohepatite não alcoólica está em fase final de revisão. Existem oito agonistas GLP-1R/GIPR/GCGR em desenvolvimento no mundo, dos quais o Retatrutide de Rita fez o progresso mais rápido e lançou a terceira fase do ensaio clínico em junho deste ano. No mesmo mês, Rita anunciou que os dados da segunda fase da pesquisa da retatrutida foram divulgados na reunião anual da ADA, mostrando que às 24 semanas a retatrutida (1 mg, 4 mg, 8 mg ou 12 mg) atingiu o endpoint principal de eficácia. avaliação para participantes obesos ou com sobrepeso sem diabetes, com perda média de peso de 17,5%. Entre os desfechos secundários, foi alcançada uma perda média de peso de 24,2% ao final de 48 semanas de tratamento. Também sintetizamos o peptídeo em laboratório com base no método publicado. O método de síntese específico será brevemente descrito e as etapas específicas podem ser enviadas para nós por e-mail.
Método 1:
As etapas detalhadas para sintetizar Retarutide usando síntese de estado sólido em laboratório são as seguintes:
Prepare os reagentes e instrumentos necessários: incluindo aminoácidos, diclorometano, carbonato de potássio, sílica gel etoxilada, acetonitrila, piridina, N-metilmorfolina, fonte de cloreto de diisopropiletil, ácido trifluoroacético, DIPEA, aminoácidos protegidos por Boc e outros reagentes, bem como agitadores magnéticos , evaporadores rotativos e outros instrumentos.
(1) Síntese de aminoácidos protegidos por Boc: Dissolva os aminoácidos necessários em diclorometano, adicione pó de carbonato de potássio, mexa uniformemente, adicione sílica gel etoxilada, continue mexendo e, em seguida, adicione piridina e N-metilmorfolina para obter aminoácidos protegidos por Boc.
(2) Síntese em fase sólida: Misture acetonitrila, fonte de cloreto de diisopropiletil e ácido trifluoroacético, mexa uniformemente, adicione aminoácidos protegidos com Boc preparados e continue agitando para obter o produto de síntese em fase sólida.
(3) Grupo de desproteção: Dissolver a síntese em fase sólida em diclorometano, adicionar ácido trifluoroacético, agitar uniformemente e depois adicionar DIPEA. Continue agitando para obter a síntese de fase sólida desprotegida.
(4) Purificação: Dissolver a síntese da fase sólida desprotegida em água, ajustar o pH para cerca de 9.0 com solução de hidróxido de sódio, depois ajustar o pH para cerca de 5.0 com ácido acético e, finalmente, precipitar o produto puro com éter.
Método 2:
As etapas detalhadas para sintetizar Retarutide usando síntese em fase líquida em laboratório são as seguintes:
Prepare os reagentes e instrumentos necessários: incluindo arginina, glicina, anidrido acético, trietilamina, carbonato de potássio, diclorometano, metanol, piridina, N-metilmorfolina, anidrido acético, acetato de sódio e outros reagentes, bem como instrumentos como agitadores, funis de separação, bombas de vácuo, fornos e colunas cromatográficas.
(1) Dissolva arginina e glicina em uma quantidade apropriada de diclorometano, adicione uma quantidade apropriada de anidrido acético e trietilamina e agite uniformemente com um agitador.
(2) Transfira a mistura dissolvida para um forno e aqueça a 80 graus C durante 1 hora para acetilar os resíduos de aminoácidos.
(3) Neutralizar a solução reagida com pó de carbonato de potássio para neutralizar o ácido acético na solução para gerar acetato de sódio e, em seguida, extrair o peptídeo gerado com diclorometano.
(4) Lave a solução de peptídeo extraído com metanol e filtre com uma bomba de vácuo para obter o peptídeo bruto.
(5) Dissolver o peptídeo bruto em uma quantidade apropriada de piridina e N-metilmorfolina, adicionar uma quantidade apropriada de anidrido acético e acetato de sódio e agitar uniformemente sob um agitador.
(5) Filtre a solução reagida com uma bomba de vácuo, lave a torta de filtro com metanol e depois filtre com uma bomba de vácuo para obter o Restarutide final.
Método 3:
As etapas detalhadas para sintetizar Retarutide usando métodos químicos em laboratório são as seguintes:
Prepare os reagentes e instrumentos necessários: incluindo arginina, glicina, anidrido acético, trietilamina, carbonato de potássio, diclorometano, metanol, piridina, N-metilmorfolina, anidrido acético, acetato de sódio e outros reagentes, bem como instrumentos como agitadores, funis de separação, bombas de vácuo, fornos e colunas cromatográficas.
(1) Dissolva arginina e glicina em uma quantidade apropriada de diclorometano, adicione uma quantidade apropriada de anidrido acético e trietilamina e agite uniformemente com um agitador.
(2) Transfira a mistura dissolvida para um forno e aqueça a 80 graus C durante 1 hora para acetilar os resíduos de aminoácidos.
(3) Neutralizar a solução reagida com pó de carbonato de potássio para neutralizar o ácido acético na solução para gerar acetato de sódio e, em seguida, extrair o peptídeo gerado com diclorometano.
(4) Lave a solução de peptídeo extraído com metanol e filtre com uma bomba de vácuo para obter o peptídeo bruto.
(5) Dissolver o peptídeo bruto em uma quantidade apropriada de piridina e N-metilmorfolina, adicionar uma quantidade apropriada de anidrido acético e acetato de sódio e agitar uniformemente sob um agitador.
(6) Filtre a solução reagida com uma bomba de vácuo, lave a torta de filtro com metanol e depois filtre com uma bomba de vácuo para obter o Restarutide final.
Múltiplas reações de síntese orgânica são necessárias para obter a molécula alvo. Além disso, este método utiliza múltiplos reagentes orgânicos e condições operacionais complexas, de modo que a síntese química de Rotarutide em laboratório geralmente não é adequada para produção em larga escala ou aplicações industriais. Para produção em larga escala ou aplicações industriais, o método mais comumente utilizado é preparar Rotarutide através de métodos de síntese, como biossíntese ou síntese em fase líquida, que são relativamente pequenos em escala laboratorial, relativamente simples de operar e adequados para preparar pequenas quantidades de produtos. . O Retarutide obtido por estes métodos é semelhante ou semelhante em estrutura e atividade biológica ao Retarutide sintetizado por métodos químicos, mas tem as vantagens de maior rendimento e preparação mais fácil. Ao mesmo tempo, também têm melhor potencial de industrialização e perspectivas de aplicação mais amplas.
Método 4:
As etapas detalhadas para sintetizar Retarutide usando métodos biológicos em laboratório são as seguintes:
Preparação dos genes e reagentes necessários: Obtenha plasmídeos contendo o gene Retatrutide da biblioteca de genes, transforme os plasmídeos com células receptoras (como Escherichia coli) e obtenha bactérias de engenharia contendo o gene Retatrutide.
(1) Cultivo de bactérias de engenharia: Sob condições adequadas de temperatura, pH e concentração de íons, use um meio de cultura para cultivar bactérias de engenharia, permitindo-lhes proliferar em grandes quantidades.
(2) Extração de Retarutide: As bactérias de engenharia cultivadas são esmagadas usando um triturador e os fragmentos celulares são separados de Retarutide usando métodos como ultrafiltração e sedimentação para obter o produto bruto.
(3) Purificação de Retarutide: O Retarutide bruto é purificado usando tecnologia de cromatografia para obter Retarutide de alta pureza.
Detecção e identificação de Rotarutide: Use cromatografia líquida de alta eficiência, espectrometria de massa, ressonância magnética nuclear e outras técnicas para detectar e identificar a estrutura do Rotarutide purificado.
A equação de reação química para a síntese biológica de Retarutide em laboratório envolve principalmente as reações químicas durante o processo de expressão gênica, incluindo duas etapas: transcrição e tradução.
Transcrição: A fita dupla do DNA se abre, usando uma fita como modelo para sintetizar as fitas de RNA, o que requer o envolvimento da RNA polimerase. A equação da reação é a seguinte:
DNA de fita dupla: DNApol → mRNA + DNApol
Tradução: Os ribossomos se ligam ao mRNA para sintetizar cadeias peptídicas, processo que requer a participação de aminoácidos e energia. A equação da reação é a seguinte:
Ribossomo+mRNA → Cadeia peptídica+PIB+Pi+H2O
Cadeia peptídica + ATP → Cadeia peptídica + AMP + PPi
Entre eles, DNApol representa DNA polimerase; ARNm representa ARN mensageiro; Ribossomos representam ribossomos; As cadeias peptídicas representam cadeias polipeptídicas; O PIB representa o difosfato de guanosina; Pi representa ácido fosfórico inorgânico; H2O representa água; ATP representa trifosfato de adenosina; AMP representa monofosfato de adenosina; PPi representa pirofosfato inorgânico. Estas reações geram as cadeias peptídicas necessárias para a síntese do Retarutide, que são então processadas e modificadas nas etapas posteriores para obter o Retarutide.
Os métodos acima são comuns para a síntese de Rotarutide em laboratório, cada um com diferentes vantagens, desvantagens e escopo de uso. O laboratório geralmente utiliza métodos de síntese em fase líquida e síntese em fase sólida para produção em pequena escala para pesquisa e uso experimental; A produção industrial, por outro lado, adota uma combinação de biossíntese e produção em fase líquida/sólida para produção em larga escala para atender à demanda do mercado. Deve-se notar que estes métodos exigem otimização rigorosa das condições e controle do processo para garantir a qualidade e pureza do produto final.